地表水中快速检测粪大肠菌群的方法

  想要知道地表水是否受到了粪水污染以及污染的程度如何，粪大肠菌群是一项非常重要的参数。因此如何能够快速、可靠、准确的检测出粪大肠菌群含量对水质健康具有重要意义。

  今天我们要讲的是通过光度法快速检测地表水中粪大肠菌群的操作方法，此方法原理是通过一定量的水样与选择性培养基混合均匀放置于44.5℃环境下，粪大肠菌群产生β-半乳糖苷酶，并分解色原底物释放出色原体使培养基呈现颜色变化，通过连续分光光度（波长：300nm～600nm）测定，依据待测水样色度变化与水中粪大肠菌群数成一定关系的原理，得出粪大肠菌群浓度。

检测时的干扰及消除

1.活性氯具有氧化性，能破坏微生物细胞内的酶活性，导致细胞死亡，可在水样采集时加入硫代硫酸钠溶液消除干扰。

2.重金属离子具有细胞毒性，能破坏微生物细胞内的酶活性，导致细胞死亡，可在水样采集时加入乙二胺四乙酸二钠溶液消除干扰。

检测所需试剂

1.粪大肠菌群检测试剂主要成分：

——蛋白胨：5g；

——硫酸锰：0.005g；

——硫酸镁：0.001g；

——硫酸锌：0.001g；

——磷酸盐：1.78g；

——两性霉素B：0.60g；

——蒸馏水1000mL。

制法：上述试剂溶于蒸馏水中，充分混匀，调整pH值为7.2～7.4，68.95kPa(115℃)，高压灭菌20min，分装贮存于4℃避光备用。也可采用市售商品化培养基制品。

2.硫代硫酸钠。

3.乙二胺四乙酸二钠。

4.硫代硫酸钠溶液：0.10g/mL，

  称取15.7g硫代硫酸钠，溶于适量水中，定容至100mL，临用现配。

5.乙二胺四乙酸二钠溶液：0.15g/mL，称取15g乙二胺四乙酸二钠，溶于适量水中，定容至100mL，此溶液保质期为30d。

6.无菌水：取适量纯水，经121℃高压蒸汽灭菌20min，备用。

检测所需仪器

1.采样瓶：具螺旋帽或磨口塞的100mL、250mL、500mL广口玻璃瓶。

2.微生物快速检测仪：

——恒温培养单元：不少于2个温控系统，温度控制精度1℃，可自动调节待检测样本培养温度（44.5℃±1℃）；

——检测单元：不少于4个独立的检测系统，可实现多个样本的同时监测；

——数据显示、处理单元：自动输出检测结果，可查询和显示历史数据。

3.高压蒸汽灭菌器：121℃可调、101.3kpa。

4.量筒：50mL、100mL。

5.移液管：1mL、10mL。

6.天平：感量0.01g。

水样采集与保存

采集方法

  点位布设及采样频次按照相关国家标准执行。与其它项目一同采样时，先单独采集微生物样品，采样瓶不得用水样洗涤，采集水样于灭菌的采样瓶中。

  采集河流、湖库等地表水样时，可握住瓶子下部直接将带塞采样瓶插入水中，约距水面10cm-15cm处，瓶口朝水流方向，拔玻璃塞，使水样灌入瓶内然后盖上瓶塞，将 采样瓶从水中取出。如果没有水流，可握住瓶子水平往前推。采样量一般为采样瓶容量的80%左右。采好水样后，迅速扎上无菌包装纸。

  采集地表水、废水样品及一定深度的水样时，可使用灭菌过后专用采样装置采样。在同一采样点进行分层采样时，应自上而下进行，避免不同层次的搅扰。

  如果采集的是含有活性氯的样品时，需在采样瓶灭菌前加入硫代硫酸钠溶液，以除去活性氯对细菌的抑制作用(每125mL容积加入0.1mL的硫代硫酸钠溶液)；如果采集的是重金属离子含量较高的样品，则在采样瓶灭菌前加入乙二胺四乙酸二钠溶液，以消除干扰（每125mL容积加入0.3mL的乙二胺四乙酸二钠溶液）。

保存方法

  采样后应在2h内检测，否则，应10℃以下冷藏但不得超过6h。实验室接样后，不能立即开展检测的，将水样于4℃以下冷藏并在2h内检测。

检测步骤

接种

  接种待测水样于装有5mL培养基的检测瓶中，定容至20mL，水样与培养基应充分混匀。

培养

  打开仪器电源开关，待仪器稳定30 min后，将接种后的检测瓶放置于微生物快速检测仪中，按照仪器说明书进行操作，设置检测温度为44.5 ℃，点击“检测”按钮，2-18小时，仪器自动培养得出结果。

空白对照实验

  采用无菌水作为待测水样按照接种和培养的操作步骤进行空白测定，测试结果不得检出，否则该次样品测定结果无效，应重新测定空白以及待测样品。

阴性及阳性对照

  将标准菌株制成300-3000个/mL的菌悬液，将菌悬液按接种和培养要求操作，阳性菌株应呈现阳性反应；阴性菌株呈现阴性反应，否则，该次样品测定结果无效，应重新测定。

  粪大肠菌群的阴性、阳性菌株可以参考相关的参照表

 

以上内容来源于《DB37/T 3787—2019 水质 粪大肠菌群测定 光度法》

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