地表水中叶绿素a的快速检测方法

目前想要了解河流、湖泊、水库等地表水是否富营养化可以通过检测水中的磷、氮等营养物质的含量进行判断，也可以通过观测水中藻类的繁殖情况判断。但今天我们要讲的是通过检测水中叶绿素a来确定水体是否富营养化。大家都知道水体富营养化最主要的表现就是水中藻类大量的繁殖，而所有的藻类都含有叶绿素a，因此通过水体中叶绿素a的含量高低可以判断该水中藻类的数量。

  其方法原理是将一定量样品用滤膜过滤截留藻类，研磨破碎藻类细胞，用丙酮溶液提取叶绿素，离心分离后分别于750nm、664nm、647nm和630nm波长处测定提取液吸光度，根据公式计算水中叶绿素a的浓度。

检测所需试剂和仪器

实验试剂

1 丙酮。

2 碳酸镁。

3 丙酮溶液：9+1。

在900ml丙酮中加入100ml实验用水。

4 碳酸镁悬浊液。

称取1.0g碳酸镁，加入100ml实验用水，搅拌成悬浊液（使用前充分摇匀）。

5 玻璃纤维滤膜：直径47mm，孔径为0.45um-0.7um。

实验仪器

1 采样瓶：1L或500ml具磨口塞的棕色玻璃瓶。

2 过滤装置：配真空泵和玻璃砂芯过滤装置。

3 研磨装置：玻璃研钵或其他组织研磨器。

4 离心机：相对离心力可达到1000×g（转速3000r/min～4000r/min）。

5 玻璃刻度离心管：15ml，旋盖材质不与丙酮反应。

6 可见分光光度计：配10mm石英比色皿。

7 针式滤器：0.45um聚四氟乙烯有机相针式滤器。

8 一般实验室常用仪器和设备。

水样采集与保存

  水样的采集一般使用有机玻璃采水器或其他适当的采样器采集水面下0.5m水样，湖泊、水库根据需要可进行分层采样或混合采样，采样体积为1L或500ml。如果水样中含沉降性固体（如泥沙等），

  应将水样摇匀后倒入2L量筒，避光静置30min，取水面下5cm水样，转移至采样瓶。在每升水样中加入1ml碳酸镁悬浊液，以防止酸化引起色素溶解。

  水样采集后应在0℃-4℃避光保存、运输，24h内运送至检测实验室过滤（若水样24h内不能送达检测实验室，应现场过滤，滤膜避光冷冻运输），水样滤膜于-20℃避光保存，14d内分析完毕。

制备水样

  在过滤装置上装好玻璃纤维滤膜。根据水体的营养状态确定取样体积，具体可以参考过滤水样体积，用量筒量取一定体积的混匀水样，进行过滤，最后用少量蒸馏水冲洗滤器壁。过滤时负压不超过50kPa，在水样刚刚完全通过滤膜时结束抽滤，用镊子将滤膜取出，将有水样的一面对折，用滤纸吸干滤膜水分。

研磨

  将样品滤膜放置于研磨装置中，加入3ml-4ml丙酮溶液，研磨至糊状。补加3ml-4ml丙酮溶液，继续研磨，并重复1-2次，保证充分研磨5min以上。将完全破碎后的细胞提取液转移至玻璃刻度离心管中，用丙酮溶液冲洗研钵及研磨杵，一并转入离心管中，定容至10ml。

浸泡提取

  将离心管中的研磨提取液充分振荡混匀后，用铝箔包好，放置于4℃避光浸泡提取2h以上，不超过24h。在浸泡过程中要颠倒摇匀2-3 次。

离心

  将离心管放入离心机，以相对离心力1000×g（转速 3000 r/min～4000 r/min）离心10min。然后用针式滤器过滤上清液得到叶绿素a的丙酮提取液（试样）待测。

检测步骤

水样测定

  将试样移至比色皿中，以丙酮溶液为参比溶液，于波长750nm、664nm、647nm、630nm处测量吸光度。750nm波长处的吸光度应小于0.005，否则需重新用针式滤器过滤后测定。

  最后水样中叶绿素a的质量浓度可以按照相应公式进行计算得出。

以上内容来自于《HJ 897-2017 水质 叶绿素a的测定 分光光度法》

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